Справочник для работников лабораторий предприятий молочной промышленности (Патратий А.П.)

П р и л о ж е н и е 3

Приготовление раствора индикатора метиленового синего

Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего готовят следую-

щим образом: 10 г метиленового синего смешивают со 100 мл 96%-ного эти-
лового спирта. Раствор ставят в термостат при 37° С на 24 ч, а затем фильт-
руют.

Приготовление рабочего раствора: к 5 мл насыщенного спиртового рас-

твора метиленового синего прибавляют 195 мл дистиллированной воды.
Смесь хорошо перемешивают. Срок хранения рабочего раствора не более 7
сут.

П р и л о ж е н и е 4

Приготовление раствора резазурина

100 мг резазурина растворяют в 200 мл прокипяченной и охлажденной

дистиллированной воды. Этот раствор является основным, и его используют
для приготовления рабочего раствора.

Срок хранения основного раствора резазурина не более 20 сут. при

температуре 3–5° С.

Рабочий раствор резазурина приготавливают из основного раствора

разбавлением последнего прокипяченной и охлажденной дистиллированной
водой в соотношении 1 : 10 (например, 5 мл основного раствора доводят во-
дой до 50 мл).

Рабочий раствор содержит 0,005% резазурина.
Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 7 сут. при темпе-

ратуре не выше 8–10° С.

Основной и рабочий растворы резазурина хранят в банках, защищен-

ных от света или из темного стекла.

П р и л о ж е н и е 5

Приготовление рабочих растворов для измерения рН

Приготовление образцовых буферных растворов. Реактивы для рН-

метрии выпускают в виде фиксаналов, рассчитанных на приготовление 1000
мл буферного раствора каждого наименования.

Приготовление буферных растворов по ГОСТ 10171–62 производят в

соответствии с «Инструкцией к пользованию фиксаналами для рН-метрии».
Инструкция прилагается в комплекте с фиксаналами.

Приготовление растворов хлорида калия (КСl). Отвешивают 256 г

кристаллического КСl х. ч., навеску переносят в сухую колбу на 1,5 л, затем в
нее приливают 1 л дистиллированной воды температурой 50–60° С. Раствор
тщательно перемешивают, охлаждают до комнатной температуры, фильтру-
ют. Профильтрованный раствор закрывают пробкой и хранят при комнатной
температуре.

220

П р и л о ж е н и е 220

Приготовление раствора для определения содержания формальдегида в
техническом формалине

Проверку концентрации формалина производят в следующем порядке:

приготовляют 0,5 л раствора сульфита натрия (Na

). Для чего навеску 126

г Na

•7Н

O или 63 г безводного Na

растворяют в мерной колбе на 500

мл  и  объем  содержимого  доводят  до  метки  дистиллированной  водой.  50  мл
раствора  сульфита  натрия  нейтрализуют  1  н.  раствором  серной  кислоты  в
присутствии фенолфталеина до слабо-розовой окраски и прибавляют точно 3
мл испытуемого формалина. Образовавшийся в результате реакции гидроксид
натрия  титруют  1  н.  раствором  серной  кислоты  до  слабо-розовой  окраски.
Объем  точно  1  н.  раствора  серной  кислоты,  израсходованной  на  титрование
образовавшегося NaОН (в мл), показывает количество формальдегида, содер-
жащегося в 100 мл формалина (г/100мл). При наличии помутнения или осадка
формалин предварительно фильтруют.

Для определения количества белка в молоке допускается применение

формалина с содержанием формальдегида не менее 36 г/100 мл.

Обычно 36–40%-ный нейтрализованный раствор формалина готовят

так: к 50 мл формалина добавляют 3–4 капли 2%-ного фенолфталеина. Снача-
ла добавляют по каплям концентрированный (30–40%-ный), а затем 0,1 н.
раствор NаОН до появления слаборозового окрашивания.

П р и л о ж е н и е 7

Приготовление растворов для определения эффективности пастеризации
по фосфатазной пробе с 4-аминоантипирином

Приготовление основного буферного раствора (рН 10±0,2).
40 г NН

Сl (хлорида аммония), взвешенного с точностью до 0,01 г, рас-

творяют в 100–200 мл дистиллированной воды, добавляют 348 мл 25%-ного
водного раствора аммиака и объем доводят до 1 л дистиллированной водой.

Приготовление рабочих растворов. Приготовление раствора А. 1,25

г динатриевой соли фенилфосфорной кислоты взвешивают с точностью до
0,0002 г и растворяют в 100 мл основного буферного раствора.

Приготовление раствора Б. 0,8 г 4-аминоантипирина, взвешенного с

точностью до 0,0002 г, растворяют в 900 мл дистиллированной воды.

Растворы А и Б должны быть бесцветными, хранят их в склянках из

темного стекла в холодильнике не более 1 мес. Пожелтевшие растворы для
работы непригодны.

Рабочий раствор субстрата готовят непосредственно перед анализом,

смешивая растворы А и Б в отношении 1 : 9. Рабочий раствор пригоден для
работы в течение 8 ч при хранении его в склянке из темного стекла.

При необходимости динатриевую соль фенилфосфорной кислоты очи-

щают от свободного фенола промыванием этиловым эфиром до полного

121

удаления фенола. Сушить реактив рекомендуется при комнатной температуре
под тягой.

Приготовление осадителя системы цинк – медь. 30 г сульфата цинка

и 6 г сульфата меди, взвешенных с точностью до 0,01 г, растворяют в 1 л дис-
тиллированной воды.

П р и л о ж е н и е 8

Приготовление растворов для определения эффективности пастеризации

по фосфатазной пробе с фенолфталеинфосфатом натрия

Приготовление аммиачной буферной смеси. 80 мл 1 н. раствора ам-

миака смешивают с 20 мл 1 н. раствора хлорида аммония (NН

Сl с рН 9,8).

Приготовление 0,1%-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия.

0,1 г порошкообразного фенолфталеинфосфата натрия, взвешенного с точно-
стью до 0,0002 г, растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл с неболь-
шим количеством буферной смеси, затем буферной смесью объем доводят до
метки и перемешивают.

П р и л о ж е н и е 9

Приготовление растворов для определения эффективности пастеризации
по реакции на пероксидазу

Раствор йодистокалиевого крахмала. Отвешивают 3 г крахмала с

точностью 0,01 г и смешивают с небольшим количеством холодной воды до
получения однородной массы. Отдельно в колбе кипятят 100 мл воды и при
непрерывном помешивании кипящую воду приливают к разведенному крах-
малу, не допуская образования комков, раствор доводят до кипения. После
охлаждения к раствору крахмала прибавляют 3 г йодида калия (КI) (х. ч. или
ч.д.а.), перемешивая до полного растворения всех кристаллов.

Раствор йодистокалиевого крахмала готовят в небольшом количестве и

хранят в темном прохладном месте. Для определения пригодности раствора,
хранившегося более двух дней, перед употреблением его проверяют. Для это-
го в пробирке кипятят 5 мл молока, охлаждают, приливают 5 капель раствора
йодистокалиевого крахмала, 5 капель 0,5%-ного раствора пероксида водорода
(Н

) и перемешивают. Появление темно-синей или серовато-синей окраски

указывает на непригодность раствора.

0,5%-ный раствор пероксида водорода. Концентрированный раствор

(пероксида водорода) в зависимости от содержания в нем пероксида

разводят водой, предварительно прокипяченной и охлажденной. Раствор Н

быстро разлагается, поэтому его следует приготавливать в небольшом коли-
честве и хранить в склянке из темного стекла в прохладном месте.

П р и л о ж е н и е 10

Приготовление растворов для определения содержания сахарозы йодо-
метрическим методом

Приготовление раствора Фелинга I см. приложение 13.
Приготовление 7,3 н. раствора соляной кислоты для инверсии.

222

К 120 мл соляной кислоты плотностью 1,19 г/см

добавляют 80 мл во-

ды.

Приготовление 0,1 н. раствора йода. 20–25 г йодида калия (КI), взве-

шенного с точностью до 0,01 г в стакане на 100 мл, растворяют в возможно
малом количестве воды. В стакан с раствором йодида калия прибавляют 12,7
металлического йода, отвешенного с точностью до 0,01 г. Жидкость переме-
шивают до полного растворения йода и количественно переносят в мерную
колбу на 1 л, затем объем доводят водой до метки.

Приготовление 0,1 н. раствора дихромата калия (К

Сr

). 4,9038 г

дихромата калия, перекристаллизованного и высушенного при 158±2°С, взве-
шивают с точностью до 0,0002 г, переносят количественно в мерную колбу
вместимостью 1 л, растворяют и объем раствора доводят водой до метки.

Можно приготовить 0,1 н. раствор дихромата калия из фиксанала.
Приготовление 1%-ного раствора крахмала. 1 г крахмала размеши-

вают с 10 мл холодной воды. Полученную смесь приливают тонкой струйкой
при непрерывном помешивании в 90 мл кипящей воды. Горячий готовый
крахмал отфильтровывают в бутылку и закрывают ее пробкой. Можно раз-
лить крахмал в маленькие бутылки, закрыть их ватными пробками и пропас-
теризовать. В таком виде раствор крахмала сохраняется длительное время.

Приготовление 0,1 н. раствора тиосульфата натрия (Na

). 24,8 г

тиосульфата натрия, взвешенного с точностью до 0,01 г, переносят в мерную
колбу на 1 л, растворяют, прибавляют 0,2 г безводного карбоната натрия и
объем доводят водой до метки. Для приготовления раствора тиосульфата ис-
пользуют бидистиллированную или дистиллированную свежепрокипяченную
воду. Охлаждают воду в колбе, закрытой пробкой, через которую проходит
хлоркальциевая трубка, наполненная кусочками натронной извести.

Титр раствора тиосульфата натрия. Устанавливают следующим об-

разом.  В коническую  колбу  вместимостью 500–750  мл  с  притертой пробкой
вносят 1–2 г КI, растворяют его в 2–3 мл воды, прибавляют 5 мл соляной ки-
слоты, разбавленной 1 : 5, 20 мл 0,1 н. раствора дихромата калия. Закрыв кол-
бу пробкой, содержимое тщательно перемешивают, дают раствору постоять 5
мин, после этого титруют раствором тиосульфата (титр которого  устанавли-
вают),  приливая  его  из  бюретки  постоянно  и  все  время  перемешивая  жид-
кость. Когда коричневый цвет раствора перейдет в желтовато-зеленый, в кол-
бу добавляют 1 мл 1%-ного раствора крахмала и для более четкого определе-
ния окончания титрования 250–300 мл воды. Титрование продолжают, прили-
вая тиосульфат натрия по каплям до резкого перехода цвета раствора от сине-
го до светло-зеленого, обусловленного наличием ионов Сг

Титр раствора тиосульфата натрия (T

), выраженный в граммах са-

харозы, вычисляют по формуле:

0171

⋅

где 0,0171 – количество сахарозы, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора тио-

сульфата натрия, г;

20 – объем 0,1 н. раствора дихромата калия, мл;

223

V – объем раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титро-

вание 20 мл 0,1 н. раствора дихромата калия, мл.

П р и л о ж е н и е 11

Приготовление растворов для определения сахарозы поляриметриче-
ским методом

Приготовление раствора ацетата цинка. 300 г ацетата цинка взвешивают с
точностью до 0,01 г и растворяют в мерной колбе на 1 л.
Приготовление раствора гексациано-(II)-феррата калия. 150 г
К

[Fе(СN)

]•3Н

O взвешивают с точностью до 0,01 г и растворяют в мерной

колбе на 1 л.

П р и л о ж е н и е 12

Приготовление раствора нитрата серебра. 1 мл раствора AgNO

дол-

жен соответствовать 0,01 г хлорида натрия (NaCl).

Для приготовления раствора отвешивают 2,9060 г AgNO

с точностью

до 0,0002 г, навеску переносят в мерную колбу на 100 мл. Приливают дистил-
лированную воду до

объема колбы и вращением колбы перемешивают со-

держимое до полного растворения реактива. Колбу доливают водой до метки
и снова перемешивают. Титр раствора проверяют по хлориду натрия.

Для проверки титра нитрата серебра готовят раствор, в 1 л которого со-

держится 10 мг хлорида натрия. Отвешивают (с точностью до 0,01 г) 10 г пе-
рекристаллизованного хлорида натрия, навеску переносят в мерную колбу на
1 л и растворяют в дистиллированной воде, постепенно доводя объем содер-
жимого до метки.

Для проверки титра раствора нитрата серебра отмеривают пипеткой 10

мл приготовленного раствора AgNO

, прибавляют 0,5 мл 10%-ного раствора

CrO

и титруют раствором NaCl при непрерывном помешивании до полу-

чения слабого кирпичного окрашивания, не исчезающего при взбалтывании.
Отношение количества миллилитров раствора NaCl к количеству миллилит-
ров AgNO

является поправкой к титру раствора AgNO

П р и л о ж е н и е 13

Приготовление растворов для определения содержания сахарозы мето-
дом Бертрана

Приготовление раствора Фелинга I. 69,26 г свежеперекристалли-

зованной сернокислой меди взвешивают с точностью до 0,01 г и растворяют в
мерной колбе вместимостью 1 л.

Приготовление раствора Фелинга II. 365 г тартрата калия-натрия

(виннокислый калий-натрий), взвешенного с точностью до 0,01 г, растворяют
при слабом нагревании в 600 мл воды и фильтруют в мерную колбу вмести-
мостью 1 л, куда затем приливают приготовленный отдельно раствор

224

гидроксида натрия (103 г NaОН растворяют в 200 мл воды). Объем раствора
доводят водой до 1 л.

Приготовление железоаммониевых квасцов. К 250 мл насыщенною

на холоду раствора железоаммониевых квасцов приливают 25 мл серной ки-
слоты. Раствор перемешивают, охлаждают, переводят в мерную колбу вме-
стимостью 1 л, разбавляют водой до горлышка колбы и после охлаждения до
температуры 20±2°С доводят водой до метки. В момент определения раствор
должен иметь температуру 20±2°С.

Приготовление раствора перманганата калия (КМnO

). 1 мл рас-

твора должны соответствовать приблизительно 10 мг меди. 4,98 г КМnO

взвешивают с точностью до 0,0003 г и количественно переносят в мерную
колбу вместимостью 1 л, растворяют и объем доводят водой до 1 л. Раствор
кипятят в течение 5 мин, охлаждают и фильтруют через асбестовый фильтр,
предварительно промытый тем же раствором, и хранят в бутылке из темного
стекла.

Титр раствора КМnO

устанавливают следующим образом: 0,25 г окса-

лата натрия (Na

) или оксалата аммония [(NН

)

)] взвешивают с точ-

ностью до 0,0003 г, количественно переносят в коническую колбу и раство-
ряют в 100 мл воды. После прибавления в колбу 2 мл серной кислоты раствор
нагревают до температуры 80±2°С и титруют раствором перманганата до по-
явления розового окрашивания.

Титр перманганата калия в миллиграммах по меди, вычисляют по фор-

муле:

1000

KMnO

⋅

где т – навеска оксалата натрия (аммония), г;
К – коэффициент пересчета оксалатов на медь [для Na

К=0,9488;

для (NН

)

К=0,8951];

V – объем раствора КМnO

, израсходованного на титрование, мл.

Приготовление 7,3 н. раствора соляной кислоты для инверсии и приго-

товление раствора Фелинга I проводят так, как описано в приложении 10 и 13.

П р и л о ж е н и е 14

Приготовление растворов для определения содержания углеводов (саха-
розы и дектрин-мальтозы)

Приготовление щелочного раствора гексацнано-(III)-феррата ка-

лия. 8 г гексацнано-(Ш)-феррата калия и 20 г гидроксида натрия взвешивают
с точностью до 0,1 г и растворяют в мерной колбе на 1000 мл, доливая воду
до метки.

Приготовление стандартного раствора глюкозы. (2 мг/мл). 1,1 г кри-

сталлической глюкозы растворяют в мерной колбе вместимостью 500 мл, до-
ливая воду до метки.

Приготовление 1 н. раствора гидроксида натрия. 40 г гидроксида

натрия взвешивают с точностью до 0,1 г и растворяют в мерной колбе на 1000
мл, доливая воду до метки.

225

Приготовление 7,3 н. раствора соляной кислоты для инверсии про-

изводят так, как описано в приложении 10.

Приготовление раствора ацетата цинка, гексацнано-(II)-феррата ка-

лия производят так как описано в приложении 11.

П р и л о ж е н и е 15

Приготовление йодокрахмальной бумаги. Фильтровальную бумагу

пропитывают смесью равных объемов 5%-ного водного раствора йодида ка-
лия и 0,5%-ного раствора крахмала, высушивают на воздухе, свободном от
хлора, и хранят в стеклянной банке с притертой пробкой.

П р и л о ж е н и е 16

Приготовление 0,01 н. раствора тиосульфата натрия. Отмеривают

50 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия в мерную колбу на 500 мл и доли-
вают до метки водой, не содержащей СO

. Титр проверяют по 0,01 н. раствору

дихромата калия. На основании результатов титрования устанавливают по-
правочный коэффициент к приготовленному раствору.

П р и л о ж е н и е 17

Статистическая обработка результатов

анализов

Результаты проведенных в лаборатории анализов должны быть воспро-

изводимыми и правильными. Правильность аналитического определения вы-
ражается разностью между полученным результатом и истинным содержани-
ем определяемого вещества в исследуемом объекте.

Для определения правильности результатов анализа основное значение

имеет  оценка  ошибок  анализа.  Г р у б ы е   о ш и б к и   или  промахи  связаны  с
неверными  отсчетами  или  упущением  в  работе;  результаты  анализов  с  гру-
быми  ошибками  отбрасывают.  С и с т е м а т и ч е с к и е   о ш и б к и   зависят  от
постоянных  причин  и  повторяются  при  всех  наблюдениях  (систематические
ошибки связаны с особенностями зрения лаборанта, с ошибками в методике
определения  и  др.,  например  ошибки  при  титровании).  С л у ч а й н ы е
о ш и б к и  зависят от неопределенных причин, несовершенства приборов, ор-
ганов чувств лаборанта и т. п.

Различают абсолютные и относительные ошибки. А б с о л ю т н а я

о ш и б к а   –  это  разница  в  абсолютных  цифрах  между  истинным  значением
определяемой  величины  и  полученным  результатом.  О т н о с и т е л ь н а я
о ш и б к а  – это отношение абсолютной ошибки к истинному значению опре-
деляемой величины, выраженное в процентах.

Для анализа цифрового материала обычно проводится его математиче-

ская обработка, позволяющая повысить достоверность результатов и сокра-
тить объем таблиц.

Наиболее распространенными и простыми формулами для проведения

математического анализа являются следующие:

226

где М

– средняя арифметическая;

Σ – сумма конкретных величин, полученных при анализе;
n – число анализов;

где

– среднее квадратичное отклонение средней арифметической, показы-

вающее, насколько тесно группируются отдельные члены ряда по от-
ношению к средней арифметической;

х – отклонение показаний анализов от величины средней арифметиче-

ской;

где

– средняя ошибка средней арифметической – величина необходимая

для дальнейшего установления степени достоверности результатов;

≥

где

– критерий Стьюдента для определения достоверности результатов.

Если ( больше 3, то достоверность результатов составляет 98–99%. При

более низком значении этих показателей достоверность можно определить по
таблице Стьюдента.

По этой же таблице можно определить значение

т. е. вероятность

возможной ошибки. Достоверными считаются значения

меньше 0,05.

Таблица критериев Стьюдента (

)

Вероятность возможной ошибки, Р

Число

анализов

0,5

0,2

0,1

0,05

0,02

0,01

0,001

1,000 3,078 6,314

12,706

31,821

63,657

637,59

0,816 1,886 2,920

4,303

6,965

9,925

31,60

0,765 1,638 2,353

3,182

4,541

5,841

12,94

0,741 1,533 2,132

2,776

3,747

4,604

8,61

0,727 1,476 2,015

2,571

3,365

4,032

6,86

0,718 1,440 1,943

2,247

3,143

3,707

5,96

0,711 1,415 1,895

2,365

2,998

3,499

5,31

0,706 1,397 1,860

2,306

2,896

3,355

5,04

0,703 1,383 1,833

2,262

2,821

3,250

4,78

0,700 1 ,372 1,812

2,228

2,764

3,169

4,59

227

Справочник для работников лабораторий предприятий молочной промышленности (Патратий А.П.) - часть 28