Студента второго курса факультета биоинженерии и биоинформатики МГУ им. М.В. Ломоносова
Снегирёва Александра Викторовича
на тему:
«Эволюция числа ядрышкообразующих районов хромосом у животных»
Научный руководитель:
д.б.н. Зацепина О.В.
Введение
Проблематика.
Данная посвящена очень важным компонентам клеточного ядра, без существования которых невозможен весь процесс синтеза белка в эукариотической клетке, - ядрышкам (см. рис. 1). Ядрышки во множестве производят рибосомы – клеточные «машины» синтеза белка. Как известно, ядрышки образуются вокруг кластеров рибосомных генов (рДНК), кодирующих основные классы рРНК (18 S, 5.8 S и 28S), которые получили название ядрышковых организаторов или ядрышкообразующих районов хромосом (ЯОР). Поэтому всестороннее изучение ядрышек является одним из ведущих факторов развития современной биологии. Довольно много работ связано со свойствами рибосомных генов, с функционально-морфологическими и биохимическими аспектами их работы, с влиянием деятельности ядрышка на жизнь клетки в целом и т.д., но крайне мало работ, в которых проводится анализ изменения числа ЯОР у различных организмов разных таксономических групп. Так, из лично мне известных работ по этой теме – это обзор Лонга и Давида «Repeated genes in eukaryotes» двадцатипятилетней давности [1], где представлены сводная таблица по числу и локализации рДНК и генов 5 S РНК у ~ 30 различных видов живых организмов. Однако после этого обзора новых работ об эволюции числа ЯОР у животных не было опубликовано ни в отечественной, ни в зарубежной литературе. И это понятно: количество ЯОР сильно варьирует не только у разных организмов, но и в клетках одного организма, поэтому трудно находить соответствия между их числом и свойствами определенных клеток и организмов в целом. Тем более необходимо учитывать эволюционные моменты, например родственные отношения между группами организмов разных видов, отделов, классов и т.д., степень сходства их рибосомных генов. Предполагается, что межклеточные, межиндивидуальные и межвидовые различия по числу и локализации ЯОР имеют важный биологический смысл. Но до сих пор не удалось найти причины данного явления и решение этой проблемы. В данном обзоре тоже нет ответов на эти вопросы, хотя делаются предположения о путях дальнейших исследований в данной области, сделаны попытки поиска корреляций между числом ЯОР и важным биологическими параметрами видов, такими как продолжительность беременности, размеры организма и др. Здесь в основном рассмотрены межклассовые (у позвоночных животных) и межвидовые (на примере отряда Грызуны) различия в числе ЯОР, но затронута и тема внутривидовых различий в числе ЯОР (на примере лабораторных мышей).
Структура ядрышка.
Для дальнейшего обсуждения проблемы необходимо знать и понимать некоторые общие моменты, связанные с изучаемыми объектами. Рассмотрим кратко структуру, свойства и функции компонентов ядрышек [2]. В ядрышке выделяют три основные зоны: фибриллярный центр (ФЦ, в нём находится неактивные гены рРНК ядрышка), плотный фибриллярный компонент (ПФК, содержит транскрибируемую рДНК и созревающую рРНК) и гранулярный компонент (ГК, где располагаются готовые субъединицы рибосом). Совокупностью ФЦ ядрышка фактически соответствует ЯОР метафазных хромосом. ЯОР располагаются во вторичных перетяжках хромосом, на которых в телофазе происходит новообразование ядрышек интерфазного ядра. При новообразовании ядрышки могут сливаться друг с другом, поэтому количество ядрышек обычно меньше, чем число ЯОР. Получившиеся таким образом ядрышки имеют весь объём генетической информации соединившихся ядрышек. ЯОР не является точечным локусом хромосомы, а является множественным по своей структуре, содержит несколько одинаковых генных участков, каждый из которых отвечает за образование ядрышка (например, при разрыве хромосомы в области ЯОР каждая из частей способна образовывать ядрышки). Число активных генов рРНК постоянно на геном, оно не меняется в зависимости от уровня транскрипции этих генов, при репликации ДНК происходит и удвоение числа генов рРНК. Однако, существуют случаи, когда гены рРНК подвергаются избыточной репликации для обеспечения продукции большего количества рибосом (если необходимо быстро и сильно увеличить синтез белка), в результате образуются экстрахромосомные рРНК, не связанные с ЯОР – происходит амплификация генов рРНК (например, в ооцитах земноводных и других животных).
Структура рДНК. Синтез рРНК.
При синтезе рРНК сначала образуется молекула-предшественник 45S РНК, которая распадается на фрагменты (так называемый процессинг): 28S, 18S и 5,8S РНК (молекула 5S РНК, тоже участвующая в сборке рибосом, синтезируется независимо и локализация гена 5S рРНК не связана с ЯОР). С помощью электронного микроскопа удалось увидеть рибосомные гены «в работе»: на депротеинизованных и сильно распластанных препаратах ядрышек наблюдались структуры в виде «ёлочек» (рис. 2). На нити рДНК располагаются молекулы фермента РНК-полимеразы I, ответственные за синтез рРНК, от которых отходят нити-транскрипты из синтезируемых молекул РНК. При этом самые длинные транскрипты находятся на одной стороне «ёлочки» (соответствуют 45S РНК), а на противоположной стороне транскрипция только начинается. Такой участок ДНК с транскриптами называется транскрипционной единицей. Между транскрипционными единицами находятся зоны спейсеров, имеющие нуклеосомное строение и не участвующие в транскрипции. Такое чередование транскрипционных единиц со спейсерами и определяет множественность рибосомных генов.
Активация ЯОР.
В неактивной форме ЯОР представлен в виде одного крупного фибриллярного центра, состоящего из рибосомных генов. В начале активации ядрышка происходит деконденсация рибосомных генов на периферии ФЦ, которые начинают транскрибироваться (синтезировать РНК). По мере усиления транскрипции единый ФЦ распадается на ряд более мелких ФЦ, связанных друг с другом декомпактизованными участками рДНК. При полной активации ядрышка все ФЦ деконденсируются и получается, что зоны ПФК содержат всю рДНК в активном состоянии. При инактивации ядрышка происходит обратный процесс конденсации рДНК. Такое инактивированное ядрышко структурно сходно с ЯОР в составе митотических хромосом. Процессы активации и инактивации играют весомую роль при определении числа и местоположения ЯОР.
Методы выявления ЯОР.
Локализацию ЯОР можно довольно точно определить на митотических хромосомах с помощью окраски солями серебра, имеющих сродство к некоторым аргентофильным белкам ядрышка. Основными из них в митозе являются РНК-полимераза I и ее специфический транскрипционный фактор белок UBF. Этот метод получил название Ag-окраски или Ag-ЯОР окраски хромосом. Показано, что аргентофильными свойствами обладают только ЯОР, которые были активны в интерфазе, предшествующей митозу. Принято считать, что максимальное число Ag-ЯОР соответствует общему числу ЯОР в кариотипе, однако из этого правила есть многочисленные исключения. Более точным является определение числа ЯОР методом молекулярной гибридизации in situ. В первоначальном варианте для этого использовали метод радиоавтографии и меченную тритием рРНК, которая при взаимодействии с денатурированной ДНК в митотических хромосомах образует ДНК-рРНК-гибрид в тех местах, где последовательности ДНК комплементарны рРНК. В этих участках и происходит засвечивание фотографической эмульсии, т.е. появляются зерна восстановленного серебра. Однако в настоящее время для молекулярной гибридизации in situ используют нерадиографические методы и пробы рДНК, меченные маленькими молекулами (биотином или дигоксигенином), которые выявляются специфическими антителами, конъюгированными с флуорохромом. Этот вариант гибридизации in situ получил название флуоресцентной гибридизации (FISH). Сопоставление данных по окраске хромосом AgNO3
и FISH-метода обнаружения рДНК показало, что Ag-окраска выявляет кластеры функционально-активных рРНК генов, тогда как FISH-метод выявляет все ЯОР, включая неактивные. Как увидим в дальнейшем, существование этих двух методов является одной из причин несовпадения результатов по количеству и локализации ЯОР.
Сборка рибосом.
60S рибосомная субъединица состоит из трёх фрагментов: 28S, 5,8S, 5S РНК. 40S рибосомная субъединица состоит из 18S РНК. Субъединицы покидают ядрышко и через ядерные поры попадают в цитоплазму. Из 40S и 60S в цитоплазме образуется полная работающая 80S рибосома: сначала 40S субъединица связывается с иРНК, а затем и с большой субъединицей (коэффициенты седиментации и механизм образования рибосом приведён для эукариотических клеток).
Рис. 1
Ультраструктура ядрышка
Рис.2
Рибосомные гены
Цели и задачи
Главная цель данной работы – сделать некоторые предположения и выводы о связи между числом ЯОР и общебиологическими различиями организмов, то есть проследить эволюцию ЯОР на конкретных примерах организмов. Поэтому мы выявили следующие основные задачи работы:
- сравнение изменения числа ЯОР с изменением числа хромосом в диплоидном наборе по классам организмов;
- сравнение изменения числа ЯОР в эволюционном ряду: от беспозвоночных до человека;
- сравнение числа ЯОР в отдельно взятом отряде (Грызуны – в этом отряде наибольший разброс числа ЯОР);
- сравнение данных по числу ЯОР у домашней мыши Mus musculus.
Материалы и методы
В ходе работы была использована интернет база данных PubMed (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Все результаты, полученные в этой работе, собраны из статей этой базы данных (см. список литературы). Также использована некоторая дополнительная литература и статьи, указанные в конце работы в списке литературы. В PubMed был произведен поиск по ключевым словам: nucleolus (-ar) organizing (-er) region и некоторым другим, связанным с ЯОР. При этом отбирались резюме статей, где указано число ЯОР в конкретных видах или родах в нормальных (без патологий) клетках взрослых животных. Как правило, число ЯОР производили в клетках костного мозга или лимфоцитах, активированных к пролиферации. Метафазные пластинки хромосом готовили по стандартной методике. Если в базе данных была ссылка на полную бесплатную версию, то рассматривалась вся статья. Также во многих статьях указывалась хромосомная локализация ЯОР, методы выявления ЯОР и число хромосом на диплоидный набор. Данные о числе хромосом у разных видов также вносили в таблицы.
Результаты и обсуждение
Полученные материалы (число ЯОР, локализация ЯОР, методы выявления ЯОР, число хромосом в кариотипе вида, а также систематическое положение многих организмов) были сведены в общую таблицу № 1. Дадим необходимые пояснения к этой таблице: № - порядковый номер организма, введён для удобства; название организма – в основном на латинском языке, иногда на английском, редко в скобках указывается русское название рода или организма; метод – метод, с помощью которого были получены результаты; число ЯО и № хром. – число пар хромосом с ЯОР или номера этих хромосом; число хром. - число хромосом на диплоидный набор; № статьи – номер, под которым следует искать источник информации в списке литературы. Виды в таблице поделены согласно таксономическим категориям: надкласс Рыбы, класс Земноводные, класс Пресмыкающиеся, класс Млекопитающие, Беспозвоночные животные. Класс Млекопитающие разделён на несколько отрядов.
Примечание. Отряды Парнокопытные (Artiodactyla) и Непарнокопытные (Perissodactyla) и отряд Мозоленогие (Tylopoda) для удобства объединены под названием Копытные животные.
Таблица № 1. Число ЯОР у видов таксономических групп.
№
|
название организма
|
метод
|
число ЯО (№ ЯО- хромосом)
|
Число хром.
|
№статьи
|
Надкласс Рыбы (Pisces)
|
1
|
Gymnotus carapo (гимнот)
|
Ag-окр.
|
1
|
17
|
2
|
Apteronotus albifrons
|
Ag-окр.
|
1
|
17
|
3
|
Sternopygus macrurus
|
Ag-окр.
|
1
|
17
|
4
|
Eigenmannia virescens
|
Ag-окр.
|
1
|
17
|
5
|
Salmo gairdneri (лососевые)
|
Ag-окр.
|
1
|
18, 24
|
6
|
Salmo brown trout (лососевые)
|
Ag-окр.
|
1
-2
|
18
|
7
|
Salmo Atlantic salmon (лососевые)
|
Ag-окр.
|
1
|
18
|
8
|
Salvelinus fontinalis
|
Ag-окр.
|
4
-6
|
18
|
9
|
Salvelinus lake trout
|
Ag-окр.
|
4
-6
|
18
|
10
|
Salvelinus arctic char (голец)
|
Ag-окр.
|
4
-6
|
18
|
11
|
Oncorhynchus tshawytscha
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
12
|
Oncorhynchus kisutch
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
13
|
Oncorhynchus keta (кета)
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
14
|
Oncorhynchus nerka (нерка)
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
15
|
Oncorhynchus gorbuscha (горбуша)
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
16
|
Oncorhynchus masou
|
Ag-окр.
|
1
|
19
|
17
|
Danio rerio
|
Ag-окр.
|
3
(№ 1, 2, 8)
|
2n = 50
|
20
|
18
|
Cobitis vardarensis (вьюновые)
|
Ag и FISH
|
2-5
|
2n = 50
|
21
|
19
|
Odontocheila confusa
|
Ag и FISH
|
1
-2
|
2n = 22
|
22
|
20
|
Odontocheila nodicornis
|
Ag и FISH
|
1
-2
|
2n = 36
|
22
|
21
|
Leporinus friderici
|
Ag-окр.
|
1
(№ 2)
|
2n = 54
|
23
|
22
|
Leporinus obtusidens
|
Ag-окр.
|
1
(№ 2)
|
2n = 54
|
23
|
23
|
Leporinus elongatus
|
Ag-окр.
|
1
(№ 2)
|
2n = 54
|
23
|
24
|
Umbra pygmaea (евдошковые)
|
Ag и FISH
|
4
|
2n = 22
|
87
|
25
|
Umbra limi (евдошковые)
|
Ag и FISH
|
4
|
2n = 22
|
87
|
26
|
Cobitis taenia (вьюновые)
|
Ag и FISH
|
1
|
2n = 48
|
38
|
27
|
Tinca tinca (линь)
|
Ag-окр.
|
1
(№3)
|
84
|
Класс Земноводные (Amphibia)
|
28
|
Odontophrynus
|
Ag-окр.
|
2
(№4,11)
|
27
|
29
|
Xenopus tropicalis
|
Ag-окр.
|
1
(№5)
|
2n = 20
|
26
|
30
|
Xenopus epitropicalis
|
Ag-окр.
|
1
(№5)
|
2n = 20
|
26
|
31
|
Rana blairi (лягушка)
|
Ag-окр.
|
1
(№10)
|
2n = 26
|
25
|
Класс Пресмыкающиеся (Reptilia)
|
32
|
Coleodactylus amazonicus
|
Ag-окр.
|
1
|
2n = 36
|
71
|
Класс Млекопитающие (Mammalia)
|
Отряд Китообразные (Cetacea)
|
34
|
Tursiops truncatus (афалина)
|
FISH
|
2
|
35
|
Stenella attenuata
|
2
|
72
|
36
|
Stenella longirostris
|
2
|
72
|
37
|
Stenella dubia
|
2
|
72
|
Копытные животные
|
38
|
Sus scrofa (свинья)
|
Ag и FISH
|
2
(№ 8,10)
|
2n = 38
|
73-79
|
39
|
Sus verrucosus
|
Ag-окр.
|
2
(№ 8,10)
|
77
|
40
|
Sus celebensis
|
Ag-окр.
|
2
(№ 8,10)
|
77
|
41
|
Sus salvanius
|
Ag-окр.
|
2
(№ 8,10)
|
77
|
42
|
Indian muntjac
|
FISH
|
2
|
3
|
43
|
Equus caballus (лошадь Пржевальского)
|
Ag-окр.
|
3
(№1,26,31)
|
2n = 64
|
42
|
44
|
Bos taurus (бык)
|
Ag-окр.
|
5
(№2,3,4,11,29)
|
2n = 60
|
31
|
45
|
Bubalus bubalus (буйвол)
|
Ag-окр.
|
5-6
(№3,4,6(8),23,24,(21))
|
2n = 50
|
31, 32
|
46
|
Swamp buffalo
|
Ag-окр.
|
5
(№4,8,20,22,23)
|
2n = 48
|
33
|
47
|
Capra ibex (коза)
|
Ag-окр.
|
5
(№2,3,4,5,28)
|
34
|
48
|
Rupicapra rupicapra (серна)
|
Ag-окр.
|
5
(№1,2,4,5,28)
|
34
|
49
|
Bison bison (бизон)
|
Ag-окр.
|
5
(№2,3,4,11,28)
|
34
|
50
|
Lama glama (лама)
|
Ag-окр.
|
5
|
51
|
51
|
Ovis aries (овца)
|
Ag-окр.
|
5
(№1,2,3,4(6),25)
|
2n = 54
|
61, 62, 63
|
Отряд Насекомоядные (Insectivora)
|
52
|
Talpa occidentalis (крот)
|
Ag и FISH
|
1
(№ 3)
|
81
|
Отряд Сумчатые (Marsupialia)
|
53
|
Monodelphis domestica
|
Ag-окр.
|
1
(№Х, 5)
|
2n = 18
|
53
|
54
|
Didelphidae (опоссумы)
|
Ag и FISH
|
1
|
2n = 14
|
40
|
55
|
Didelphidae (опоссумы)
|
Ag и FISH
|
1
|
2n = 18
|
40
|
56
|
Didelphidae (опоссумы)
|
Ag и FISH
|
1
|
2n = 22
|
40
|
57
|
Macropus rufogriseus (гигантский кенгуру)
|
Ag-окр.
|
1
(№X)
|
30
|
58
|
Potorous tridactylus (rat kangaroo)
|
FISH
|
1
(№X)
|
2n = 12
|
3, 13
|
Отряд Рукокрылые (Chiroptera)
|
59
|
Artibeus lituratus
|
Ag и FISH
|
3
(№ 5,6,7)
|
28
|
60
|
Artibeus jamaicensis
|
Ag и FISH
|
3
(№ 5,6,7)
|
28
|
61
|
Artibeus fimbriatus
|
Ag и FISH
|
3
(№ 5,6,7)
|
28
|
62
|
Artibeus cinereus
|
Ag и FISH
|
3
(№ 9,10,13)
|
28
|
63
|
Desmodus rotundus (вампиры)
|
Ag и FISH
|
1
(№ 8)
|
29
|
64
|
Diphylla ecaudata
|
Ag и FISH
|
1
(№ 13)
|
29
|
65
|
Phyllostomus (копьенос)
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
66
|
Phylloderma
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
67
|
Trachops
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
68
|
Tonatia
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
69
|
Sturnira
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
70
|
Platyrrhinus
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
71
|
Glossophaga
|
Ag и FISH
|
1
|
28
|
72
|
Fruit bat (Carollia perspicillata)
|
FISH
|
1
(№X)
|
2n = 20
|
3
|
73
|
Carollia castanea
|
FISH
|
0
|
2n = 22
|
3
|
Отряд Приматы (Primates)
|
74
|
Gorillas (Gorilla gorilla)
|
Ag-окр.
|
2
(№1,2)
|
37
|
75
|
Orangutan (Pongo pygmaeus)
|
Ag-окр.
|
8
(№13,14,15,18,21,22+2)
|
37
|
76
|
Gibbon (Hylobates hoolock)
|
Ag-окр.
|
1
|
37
|
77
|
Human (Homo sapiens)
|
Ag-окр.
|
5
(№13,14,15,21,(22))
|
2n = 46
|
43-49
|
78
|
Orangutan (Pongo pygmaeus)
|
Ag-окр.
|
9
(№11-17,22,23)
|
2n = 48
|
65
|
79
|
Tupaia glis
|
Ag-окр.
|
4
|
2n = 60
|
7
|
80
|
Tupaia belangeri
|
Ag-окр.
|
2
|
2n = 62
|
7
|
81
|
Tupaia chinensis
|
Ag-окр.
|
2
|
2n = 62
|
7
|
82
|
Chimpanzee (Pan troglodytes)
|
Ag-окр.
|
5
(№13,14,18,21,22)
|
37
|
83
|
Chimpanzee (Pan troglodytes)
|
FISH
|
9
(№15-23)
|
37
|
Отряд Зайцеобразные (
Lagomorpha)
|
84
|
Oryctolagus cuniculus (кролик)
|
Ag-окр.
|
4
(№13,16,20(21))
|
2n = 44
|
60
|
Отряд Хищные
(Carnivora)
|
85
|
Canis familiaris (собака)
|
Ag-окр.
|
2
(3+№Y)
|
2n = 78
|
35
|
86
|
Canis familiaris (собака)
|
Ag-окр.
|
8
(№5,8,14,16,19,21,32,37)
|
2n = 78
|
36
|
Беспозвоночные животные (Achordata)
|
87
|
Tapinoma nigerrimum
|
Ag и FISH
|
1
(№ 6)
|
n = 9
|
82, 83
|
88
|
Tapinoma erraticum
|
1
-2
|
n = 8
|
83
|
89
|
Melipona marginata (пчела)
|
Ag-окр.
|
1
|
2n = 18
|
52
|
90
|
Mellitobia australica (оса)
|
Ag-окр.
|
1
|
2n = 12
|
52
|
91
|
Cycloneda sanguinea
|
Ag-окр.
|
1
|
2n = 18
|
52
|
92
|
Euglossa sp.
|
Ag-окр.
|
5
|
n = 21
|
52
|
93
|
Plebeia sp.
|
Ag-окр.
|
1
|
2n = 34
|
52
|
94
|
Parascaris univalens (нематода)
|
Ag и FISH
|
1
|
2n = 2
|
64
|
95
|
Drosophila (плодовая муха)
|
Ag-окр.
|
1
(№ Х)
|
41
|
96
|
Ixodes scapularis (клещ)
|
Ag-окр.
|
3
(№ 7,10,Х)
|
2n = 28
|
50
|
На основании табличных данных можно сделать ряд наблюдений и выводов:
- число хромосом с ЯО у рыб практически одинаково и равно одной паре хромосом (хотя разброс даже до 6 пар хромосом), такое количество ЯОР выявляется у 63% рассмотренных рыб. Как ни странно, но у рыб при увеличении числа хромосом в диплоидном наборе количество ЯОР почти не увеличивается, скорее можно было бы сказать, что оно уменьшается, например, рыбы рода Leporinus (2n = 54) имеют 1 п.х. (пару хромосом) с ЯО, тогда как рыбы рода Umbra (2n = 22) имеют 4 п.х. с ЯО, так что соответствие общего числа ЯОР числу хромосом не прослеживается;
- число хромосом с ЯОР у земноводных колеблется между одной и двумя парами хромосом (у 75% - 1 п.х.), что-то определенное о корреляции между числом ЯОР и хромосом сказать трудно из-за малого количества материала по данной группе организмов;
- единственный представитель рептилий в нашей подборке имеет одну пару хромосом с ЯОР;
- далее рассмотрим число ЯОР в отдельных отрядах млекопитающих:
1) отряд Китообразные: 2 п.х. с ЯОР;
2) у крупного рогатого скота 5 п.х. с ЯОР, у более мелких копытных животных – 2 п.х. с ЯОР. Здесь, в общем, рассматриваемая тенденция к увеличению числа ЯОР с увеличением генотипа тоже не прослеживается (у крупных животных 2n = 48, 50, 54, 60, а число ЯОР остаётся постоянным), так у лошади с самым большим хромосомным набором всего 3 п.х. с ЯОР;
3) у крота – 1 п.х. с ЯОР;
4) у сумчатых животных в основном 1 п.х. с ЯОР (80%);
5) у рукокрылых – от 0 до 3 п.х. с ЯОР, хотя одна п.х. с ЯОР встречается в два раза чаще, чем другое число. Интересно, что у Carollia castanea методом FISH не выявлено ни одной хромосомы с ЯОР. Поскольку организмы не могут существовать без рДНК, транскрипция которой необходима для образования рибосом, очевидно, данные об отсутствии ЯОР у данного вида являются артефактом. Его появление можно объяснить сложностью выявления ЯОР у Carollia castanea.
6) у приматов – от 1 до 8 (9) п.х. с ЯОР, рассматриваемая тенденция прослеживается у высших приматов, у орангутана и шимпанзе число ЯОР больше, чем у человека;
7) у кролика 3 п.х. с ЯОР;
8) у собаки – от 4 до 8 п.х. с ЯОР, с чем связан такой разброс непонятно;
5. у беспозвоночных обычно одна п.х. с ЯОР (встречается у 70%), но их число порой доходит до пяти (Euglossa, у которой самый большой генотип).
Итак, мы рассмотрели зависимость числа ЯОР от числа хромосом в диплоидном наборе в разных таксономических группах. Почти с уверенностью можно сказать, что строгой корреляции между числом ЯОР и хромосом не наблюдается, а редкое её выполнение у некоторых групп организмов скорее связано со случайными факторами.
Теперь решим задачи, поставленные во втором пункте раздела «Цели и задачи»: сравним изменение ЯОР в эволюционном ряду организмов. На рис. 3 представлена схема, где показано среднее число ЯОР в крупных таксонах. Если смотреть в общих чертах, то при осложнении организации животных наблюдается увеличение числа ЯОР. Так, например, у млекопитающих их число заметно больше, чем нижестоящих групп в эволюционной лестнице, а у высокоорганизованных приматов их среднее число равно 5,4. Такое увеличение ЯОР возможно связано с резким увеличением метаболических процессов в клетках млекопитающих, в том числе синтезов белков на рибосомах, связанное также с переходом данной группы к теплокровности. Различия в отделах млекопитающих по числу ЯОР может быть результатом широкого распространения этих животных, различия их ареалов и форм обитания, активности их жизни, длительности беременности, частоты размножения, размеров тела, численности потомства. Так у крупных Копытных животных и приматов – самое большое среднее число ЯОР. В тоже время у не менее крупных представителей отряда Китообразных их среднее число равно 2,0. Те же животные имеют самых длинных период беременности, хотя у лошади этот период равен 11 месяцев, а число ЯОР тем не менее равно 3. У хищных животных, ведущих активных образ жизни и также, в общем, являющимися крупными животными, число ЯОР велико, а у неактивных насекомоядных и рукокрылых – крайне мало. У активно размножающихся животных (грызуны, кролики) число ЯОР занимает промежуточное значение, а у редко размножающихся – крайние. Грызуны и кролики ещё являются и мелкими животными, также как рукокрылые и насекомоядные. При этом значение 6,0 числа ЯОР у хищных не следует воспринимать всерьёз, так как оно получено как среднее арифметическое двух несовпадающих данных по числу ЯОР у одного организма – собаки, но известно, что, например, у кошки число ЯОР равно 2, так что средним числом ЯОР у хищных является что-то между числом ЯОР у приматов и грызунов. Промежуточное положение хищных по числу ЯОР подтверждает таблица № 2.
Таблица №2. Сравнение жизненных параметров и числа ЯО у отделов млекопитающих.
Отдел
|
Б
|
Р
|
А
|
ИР
|
ПЖ
|
ЯО
|
Насекомоядные
|
↓
|
↓
|
↓
|
↑
|
↓
|
1,0
|
Сумчатые
|
↓
|
↑↓
|
↓
|
↑↓
|
↓
|
1,2
|
Рукокрылые
|
↓
|
↓
|
↓
|
↓
|
↑
|
1,5
|
Грызуны
|
↓
|
↓
|
↑
|
↑
|
↓
|
2,7
|
Зайцеобразные
|
↓
|
↓
|
↑
|
↑
|
↓
|
3,0
|
Хищные
|
↑↓
|
↑↓
|
↑
|
↑↓
|
↑
|
6?
|
Китообразные
|
↑
|
↑
|
↓
|
↓
|
↑
|
2,0
|
Копытные
|
↑
|
↑
|
↓
|
↓
|
↑
|
3,8
|
Приматы
|
↑
|
↑
|
↓
|
↓
|
↑
|
5,4
|
Здесь Б – продолжительность беременности, Р – размер животного, А – активность и подвижность, ИР – интенсивность размножения, ПЖ – продолжительность жизни, ЯО – среднее число пар хромосом с ядрышковым организатором.
Сопоставляя табличные данные можно выделить три группы организмов:
1. с высокой интенсивностью размножения и активностью: грызуны, зайцеобразные.
2. с продолжительным периодом беременности и с крупными размерами: копытные, приматы, китообразные, а также хищные – переходная форма между 1. и 2.
3. все остальные, с малыми активностью, относительно коротким периодом беременности и небольшими размерами.
При этом, как видно из таблицы, у животных 3-ей группы число ЯОР колеблется от 1 до 1,5, то есть мало; у животных 1-ой группы оно стремится к 2,5-3; у животных 2.-группы оно больше 3,8. Исключение составляют китообразные, у которых два ЯОР, но, например, у свиньи, кошки, некоторых приматов их тоже два, что только подтверждает правило о том, что сравнение средних значений порой приводит к неполному рассмотрению и пониманию картины. И, тем не менее, это дало вполне наглядный результат без применения каких-либо сложных математических формул. Как результат, мы получили не строгую, но наглядную и ясную модель, где ряд параметров организма приводится в соответствие с числом ЯОР. Конечно, можно было бы рассмотреть ещё некоторые параметры, но это бы только усложнило восприятие информации. Здесь мы не станем вдаваться в подробности насчёт изменения числа ЯОР у более низших позвоночных, так как эта тема очень сложна, а информационная база недостаточна, чтобы делать какие-либо выводы. Возможно, тут играют роль те же параметры, но несколько изменённые (например, вместо периода беременности – период созревания яйца), что и у млекопитающих.
Рис. 3
Схематичное изображение таксономических групп и среднего значения числа ЯОР в каждой группе.
Теперь перейдём к разбору отдела Грызуны с наиболее вариабельным числом ЯОР. С чем же связана такая изменчивость? В первую очередь стоит покритиковать методы выявления ЯОР: даже вроде бы аккуратный FISH-метод может дать у разных исследователей разные результаты. Во-первых, у методов существует ряд модификаций, что может быть причиной расхождений между данными, полученными разными авторами. Особенно много модификаций у метода серебрения, что делает этот и без того неточный метод (о неточности см. во введении) ещё и очень вариабельным, что в полной мере проявляется при анализе числа ЯОР у Грызунов. Очень сложно сравнивать такие данные, но вероятно в этом виновны не только методы. Число ЯОР изменяется от 0 до 11 (см. таблицы № 3 и № 4). При этом стоит учесть, что в статьях иногда описывают все хромосомы, на которых ЯОР выявляется в серии опытов, а разные опыты могут показать ЯОР на разных хромосомах, а среднее число ЯОР указать забывают. Так, 11 хромосом у мыши – результат такой забывчивости (конечно, их не 11, а значительно меньше). Во-вторых, Ag-метод пользуется несравненно большим спросом из-за своей простоты, быстроты и дешевизны, и мы должны довольствоваться большей частью сомнительными результатами. В-третьих, действительно, в разных клетках одного организма может выявляться разное число ЯОР, но и данный феномен скорее есть методическая ошибка (все клетки организма тотипотентны и содержат всю полноту генетической информации, в том числе всю рДНК). Наиболее стабильны данные по числу ЯОР у крысы Rattus norvegicus – все сходятся во мнении, что у неё 3 п.х. с ЯОР. Также 3 п.х. с ЯОР имеют виды рода Mus (кроме Mus musculus, об этом позже) и кактусовый хомячок (FISH), полёвки имеют 1 п.х. с ЯОР, сони и лемминги – 2 п.х. с ЯОР. Расхождения в числе ЯОР обнаружены у двух видов хомячков - сирийского и китайского. При выявлении ЯОР у китайского хомячка были использованы оба метода: Ag-метод показал активные ЯОР на № 4 и 5 хромосом, тогда как FISH-метод в двух других случаях, кроме 4 и 5, показал также ЯОР на хромосомах 6 и X. У сирийского хомячка в одном случае Ag-методом было выявлено 5 п.х. с ЯОР, а в другом – тоже 5 п.х. с ЯОР: № 6, 9, 16, 17, 19, но в этом случае иногда ЯОР выявлялись и на 2, 10 и 13 хромосомах. Результаты по грызунам ещё раз подтверждают, что число ЯОР не зависит от числа хромосом в диплоидном наборе: у Microtus agrestis (2n = 50) вообще не найдено ЯОР, тогда как у Akodon arviculoides (2n = 14) они обнаружены на 4 п.х.
Таблица №3. Число ЯОР у грызунов (Rodentia).
№
|
Название организма
|
Метод
|
число ЯОР (№ЯО-хромосомы)
|
число хром.
|
№статьи
|
1
|
Mus spretus
|
3
(№4,13,19)
|
56
|
2
|
Rattus norvegicus (крыса)
|
Ag-окр.
|
3
(№3,11,12)
|
2n = 42
|
66,70
|
3
|
Rattus norvegicus (крыса)
|
Ag-окр.
|
3
|
2n = 42
|
67,68,69
|
4
|
Chinese hamster (Cricetulus griseus)
|
Ag-окр.
|
2
(№4,5)
|
2n = 22
|
5
|
5
|
Eliomys quercinus (садовая соня)
|
Ag-окр.
|
2
|
6
|
6
|
Akodon arviculoides
|
Ag-окр.
|
4
(№3,4,5,X)
|
2n = 14
|
8
|
7
|
Chinese hamster (Cricetulus griseus)
|
FISH
|
4
(№4,5,6,X)
|
2n = 22
|
13
|
8
|
Syrian hamster (Mesocricetus auratus)
|
Ag-окр.
|
5
|
2n = 44
|
12
|
9
|
Phodopus sungarus (джунгарский хомячок)
|
Ag-окр.
|
4
|
2n = 28
|
12
|
10
|
Myopus schisticolor (лемминг)
|
Ag и FISH
|
2
(№5,12)
|
15
|
11
|
Microtus rossiaemeridionalis (полёвка восточноевропейская)
|
Ag-окр.
|
1
(№16)
|
16
|
12
|
Microtus transcaspicus (полёвка)
|
Ag-окр.
|
1
(№11)
|
16
|
13
|
Mus platythrix
|
3
(№5,8,12)
|
2n = 26
|
57
|
14
|
Syrian hamster (Mesocricetus auratus)
|
Ag-окр.
|
5-8
(№6,9,16,17,19 (2 10 13))
|
2n = 44
|
80
|
15
|
Trichomys apereoides
|
Ag-окр.
|
1
(№1)
|
2n = 30
|
85
|
16
|
Cricetulus migratorius (армянский хомячок)
|
Ag-окр.
|
4
(№2,4,6,7,8)
|
39
|
17
|
Microtus agrestis (тёмная полёвка)
|
FISH
|
0
|
2n = 50
|
3
|
18
|
Peromyscus eremicus (cactus mouse)
|
FISH
|
3
(№8,9,10)
|
2n = 48
|
3
|
19
|
Chinese hamster (Cricetulus griseus)
|
FISH
|
4
(№4,5,6,X)
|
2n = 22
|
3
|
20
|
Apodemus (wood mice)
|
1
- 2
|
86
|
Теперь отдельно изучим поведение числа ЯОР у мыши Mus musculus, где их число колеблется от 3 до 11 (таблица № 4). Как правило, при определении числа ЯОР используют метод серебрения, что привносит дополнительные трудности в оценку их числа. Но только ли в этом причина? Возможно, такие несоответствия – это свойство самих рибосомных генов, которые относятся к умеренно повторяющимся генам и подвержены генетической рекомбинации. Однако это может быть связано с высокой плодовитостью мышей и другими характерными для грызунов признаками.
Таблица № 4. Лабильность ЯОР у мыши (2n = 40).
№
|
Название организма
|
Метод
|
число ЯОР (№ ЯО-хромосом)
|
№статьи
|
1
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
11
(№4,8,9,10,11,12,15,16,17,18,19)
|
55
|
2
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
3
(№15,18,19)
|
11
|
3
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
4
--7
|
9
|
4
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
5
|
10
|
5
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
6
(№12,15,16,17,18,19)
|
54
|
6
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
5
(№12,15,16,17,18)
|
58
|
7
|
Mus musculus
|
8
(№5,6,9,12,17,18,19,X)
|
59
|
8
|
Mus musculus
|
Ag-окр.
|
4
(№12,15,16,18)
|
35
|
содержание ..
609
610
611 ..
|
|
|